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这里有 16 种常用实验细胞的培养方案
15 人阅读发布时间：2026-04-10 13:24
Section.01
常见细胞培养方案
本期推文聚焦 16 种细胞的培养及注意事项！
表 1. 疾病研究常用的实验细胞。
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U87MG 细胞
人脑星形胶质母细胞瘤细胞，具有上皮形态，是源自中枢神经系统恶性肿瘤的细胞系。增殖速度快、侵袭性强，还存在明显的遗传与表型异质性[1]。
培养条件：DMEM 培养基，10% 胎牛血清 FBS，1% 青霉素链霉素双抗，2 mM L-谷氨酰胺[2]。
图 1. U-87 MG 细胞低密度和高密度生长形态[3]。
注意事项：
1. 细胞贴壁能力较弱：消化时间短，严格把控时间 (细胞回缩、间隙变大且部分脱落时，加 2-3 mL 完全培养基终止消化)；试剂需充分预热，避免室温放置过久。
2. 易聚集成团：胰酶充分消化并吹散，镜检确认单细胞状态；必要时用多聚赖氨酸包被培养器皿；避免密度过高、血清不适。
3. 血清要求高：选用高品质专用培养基及血清，保障生长速度与贴壁性。
4. 控制接种密度：传代比例 1:2-1:4，70%-80% 密度时传代；密度过低生长缓慢，过高易聚团。
MDA-MB-231 细胞
典型的三阴性乳腺癌 (TNBC) 细胞，具有高侵袭性和转移性[4]。
培养条件：Leibovitz’s L-15 培养基，10% 胎牛血清，1% 青霉素链霉素双抗[5]。
图 2. MDA-MB-231 细胞低密度和高密度生长形态[6]。
注意事项：
1. 接种密度：细胞生长偏慢，传代比例推荐 1:2，避免密度过低。
2. 操作注意：对机械损伤敏感，消化吹打需轻柔、次数少，防止细胞形态异常或生长受阻。
HGC-27 细胞
人胃癌细胞，来自于未分化胃癌，能产生并分泌黏液素[7]。
培养条件：RPMI 1640 培养基，10% 胎牛血清，2 mM 谷氨酰胺，10 mM HEPES[8]。
图 3. HGC-27 细胞低密度和高密度生长形态[9]。
注意事项：
1. 定期换液与污染监测：每 2-3 天换液，防止废物堆积或 pH 波动；定期查细胞形态、增殖，排查污染。
2. 接种密度：传代比例 1:2 ~ 1:4，70% - 80% 汇合度时传代。
3. 控制胰酶消化时间：避免过长损伤细胞。
4. 冻存复苏温度要求：冻存缓慢降温，复苏快速升温，减少损伤。
5. 复苏后换液原则：24 小时后首次换液，避免频繁操作。
H22 细胞
小鼠肝癌细胞，分离自小鼠腹水，为悬浮细胞，呈淋巴母细胞样[10]。
培养条件：RPMI-1640培养基，10% 胎牛血清，1% 青霉素链霉素双抗[11]。
注意事项：
1. 小鼠饲养时长：腹水接种后，小鼠饲养时间以 5 天为佳；饲养过久易导致小鼠死亡，且腹水中红细胞含量会显著升高。
2. 细胞冻存前培养时间：分离得到的腹水细胞建议先体外培养 8 小时左右再进行冻存，既能有效去除残留红细胞，又可使细胞状态调整至最佳。
3. 体外培养传代周期：H22 细胞体外培养增殖时，需在 5 代内进行一次腹水培养；若长期体外传代超过 5 代，细胞状态会急速变差，碎片明显增多。
4. 收集腹水红细胞过多时，可以用红细胞裂解液去除；用分离液分离细胞时，可多次分离筛选，保证细胞的纯度。
5. 腹水接种后，腹水长出时间会因细胞活力、接种细胞量的不同而存在差异；可通过观察小鼠状态判断接种是否成功，成功接种的小鼠活动力会出现明显减弱。
CHO-K1细胞
中国仓鼠卵巢细胞，实验中常用的一个细胞株，上皮样细胞，培养条件简单，贴壁强度适中，比较容易转染[12]。
培养条件：Ham's F-12 培养基，10% 胎牛血清[13]。
图 4. CHO-K1 细胞低密度和高密度生长形态[14]。
注意事项：
1. 接种前可将完全培养基置于培养箱平衡 15 min 以上，使 pH 稳定在 7.0-7.6。
2. 消化时避免摇晃培养瓶，可 37℃ 孵育加速消化。
3. 血清蛋白可竞争性抑制胰酶活性。
4. 传代比例为 1:4-1:8。
5. 冻存密度控制在 1-10×10? cells/mL。
6. DMSO 需最后添加，加完后迅速转移至低温环境梯度冻存。
Caco-2 细胞
人结肠腺癌细胞，贴壁生长，为多边形或梭形，增殖速度较快[15]。
培养条件：DMEM 培养基，10% 胎牛血清，1% 青霉素链霉素双抗，1% 非必需氨基酸[16]。
图 5. Caco2 细胞低密度和高密度生长形态[17]。
注意事项：
1. 控制接种密度 2-4×104 cells/cm2，密度过高/过低易导致分化异常或增殖延迟；80-90% 融合时传代，间隔 3-5 天，避免频繁操作。
2. 细胞贴壁速度较慢，尤其是复苏初期，通常需要 2-3 天才能完成贴壁并铺展，期间细胞易出现空泡结构。
3. 传代时，需确保胰酶消化后细胞充分分散为单细胞，否则会影响后续贴壁效果。
4. 该细胞呈成团生长特性，细胞密度越高，胞体表面的空泡及黑点数量也会随之增多。
5. 汇合度达 80% 时进行传代，此时细胞虽成片分布，但实际密度已处于较高水平。
6. 若细胞过度汇合、生长过满，会严重影响细胞状态，传代后易出现碎裂、死亡的情况。
7. 细胞培养时间越长，所需的胰酶消化时间也相应增加。
VSMC 细胞
血管平滑肌细胞，是构成血管壁中膜的核心细胞类型，在血管生理功能调节和病理重构中发挥关键作用[18]。
培养条件：DMEM 培养基，10% 胎牛血清，1% 青霉素链霉素双抗[19]。
图 6. VSMC 细胞低密度和高密度生长形态[20]。
注意事项：
1. 避免反复冻融，未用完冻存液需丢弃。
2. 细胞汇合度 80%~90% 时传代，首次传代 1:2 接种。
3. 消化时严格控制 0.05% 胰酶-EDTA 作用时间 (2~3 分钟)，避免过度消化导致细胞成团或死亡；镜下观察细胞变圆、少量脱落时立即用含血清培养基终止。
4. 沿瓶壁缓慢吹打 20~30 次至单细胞悬液，避免垂直吹打和产生气泡，减少机械损伤。
5. 选取对数生长期 (汇合度 70% 左右)、健康无污染的低代次细胞 (≤10 代) 冻存，避免老化细胞。
Section.02
小结
不同细胞的培养需求各有差异，本期我们聚焦 16 种常用细胞，整理分享了实操性极强的培养经验。希望这些干货内容能切实帮到大家，让细胞培养更顺利、更高效！
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