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常见实验技术∶ 免疫染色 (IHCICCIF) Get 全流程!_MedChemExpress(MCE 中国)

361 人阅读发布时间:2025-06-25 16:43

IHC/ICC/IF 总迷糊? 免疫染色为啥感觉那么多?
速戳本文!让你的看后胸有成竹~

 

Section.01
免疫染色知多少?
免疫染色 (Immunostaining) 是一项重要的生物学技术,主要用于检测组织切片中的特定抗原并获取有关细胞结构的信息。
 

免疫染色是基于抗体与其靶抗原的特异性结合 (图 1)。抗原抗体复合物的检测依赖于与抗体偶联的标记物。使用酶时,需要酶的比色法或化学发光法底物。酶催化反应生成有色产物,可使用光学显微镜检测。对于荧光染料,可使用荧光显微镜测量荧光信号,无需额外的底物[1]

 
新闻图片1

图 1. 免疫染色的典型工作流程。

免疫染色始于细胞或组织制备,其中特定细胞或组织样本被固定以保留其结构。然后将样本与封闭缓冲液孵育,以防止抗原和抗体之间的非特异性结合。随后,将样本与特异性结合目标抗原的一抗孵育,再与连接荧光染料或酶的二抗孵育。清洗去除多余抗体后,使用封固剂将样本封固在载玻片上。最后,使用合适的显微镜观察抗原-抗体复合物。

免疫染色:直接法 or 间接法?
免疫染色主要使用两种方法:间接免疫染色法和直接免疫染色法。
  • 间接法:同时使用一抗和二抗。一抗可特异性结合目标抗原。一抗通常在动物体内通过注射特定抗原而产生 (例如山羊、小鼠或兔子)。二抗通常与可检测标记物(例如酶或荧光染料)偶联,并与一抗结合。为防止交叉反应,最好使用与产生一抗的物种不同的二抗。多个二抗可以与每个一抗相互作用,从而增强可检测信号。此外,一种二抗可以与多种一抗一起使用
  • 直接法:使用与特异性结合抗原的可检测标记物偶联的单一抗体。该方法只需一步抗体孵育,比间接法更简单、更快捷。然而,由于直接法使用单一抗体,其灵敏度低于间接法,而且由于可用的探针/酶偶联一抗有限,其应用受到限制。
新闻图片2
图 2. 直接法和间接法示意图。
两种方法各有优势,研究人员可参考下面表格 (表 1)[1],根据实验目的选择合适的方法!
 
表 1. 直接和间接免疫染色方法的特点
新闻图片3
免疫染色:ICC、IHC 与 IF?

ICC 与 IHC 均属于免疫染色。免疫组化 (Immunohistochemistry, IHC) 是用于检测组织切片中特定抗原或蛋白质,广泛应用于病理学,以诊断癌症等疾病和研究组织特异性蛋白质测定。当应用于细胞学制备时,通常称为免疫细胞化学 (Immunocytochemistry, ICC),其适用于多种细胞学样本,例如细胞块、风干玻片、乙醇固定玻片、直接涂片、细胞离心涂片和液基细胞学 (Liquid-based cytology, LBC) 样本[2][3]。ICC 常用于识别细胞中特定生物标志物的存在、亚细胞定位和原位大分子相互作用[1]

免疫荧光 (Immunofluorescence, IF) 也是利用抗体和抗原的结合特异性,是免疫染色的一种广泛应用的例子。IHC 通常使用多种不同的酶标记物来检测目标抗原。(当然,IHC 也可升级为多重荧光染色的 mIHC)。ICC 通过使用与抗体偶联的荧光染料或酶,可以分别在荧光显微镜和光学显微镜下可视化目标抗原。IF 利用荧光显微镜检测与抗体结合的荧光染料,此外,IF 可进行多种荧光染色,允许研究人员进行多重标记,IF 的多重染色常用于评估大分子的共定位[1]

注意:对于多重染色,需要选择发射光谱不重叠的荧光染料,以防止光谱重叠导致信号错误解读。
表 2. 不同类型免疫染色的特点[1]
新闻图片4
原文参考:mp.weixin.qq.com/s/i7hfmZ99xjVdJFyT93g5ow
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[1] Park G, et al. Brief guide to immunostaining. Mol Cells. 2025 Jan;48(1):100157. doi: 10.1016/j.mocell.2024.100157. Epub 2024 Nov 19.
[2] Srebotnik Kirbis I. State of the Art and Science of Immunocytochemistry. Acta Cytol. 2025;69(1):51-59. 
[3] Jain D, et al. Diagnostic and Predictive Immunocytochemistry in Lung Cancer. Acta Cytol. 2025;69(1):69-76. 
[4] Pinto D, Schmitt FC. Immunohistochemistry Applied to Breast Cytological Material. Pathobiology. 2022;89(5):343-358. 
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