Co-IP 实验不踩坑：蛋白 "拉下场" 的秘密！揭秘Co-IP实验操作技巧

在蛋白生物学的世界里，Co-IP 是解锁蛋白质“朋友圈”的神兵利器。但如果操作不当，它可能会变成实验室里的“尴尬社交”。今天，我们就来聊聊如何让你的 Co-IP 实验优雅又高效，轻松把蛋白“拉下场”！ 01

什么是 Co-IP？ 免疫共沉淀 (Co-Inmunoprecipitation, Co-IP) 是一种利用目标蛋白特异性抗体与蛋白 A/G 磁珠或琼脂糖珠结合，从而沉淀目标蛋白及其相互作用蛋白的技术 [1-4]。

简单来说，就是利用抗体捕捉目标蛋白，看看有哪些其他蛋白会“搭顺风车”来到沉淀派对。这样我们就可以知道哪些蛋白质在细胞内是好朋友，经常一起 Hang out！

Co-IP 优势

可沉淀诱饵蛋白在天然组织细胞状态下存在互作关系的所有蛋白；

可沉淀整个复合体中直接/间接互作的多个蛋白，研究复合体组成

可与质谱鉴定连用可以初筛到一系列未知蛋白，再通过其他技术进一步验证；

分离得到天然状态下相互作用的蛋白质复合体，结果更真实可靠。

Co-IP 分类

根据抗体来源、靶蛋白表达方式及样本类型等差异，Co-IP 可分为单克隆抗体/多克隆抗体 Co-IP、内源性/外源性 Co-IP、探索型/验证型 Co-IP 等类型。

在众多 Co-IP 分类方式中，内源性和外源性 Co-IP 就像科研界的双子星，不仅最常用，还各自闪耀独特的光芒！

 小贴士：

内源性 Co-IP：研究细胞或组织中自然表达的蛋白质。外源性 Co-IP：研究经过转染介导的外源表达系统来表达的蛋白质。

02 

操作步骤与结果分析

Co-IP 实验流程

图 2. Co-IP 实验流程图[1][5]。

Co-IP 流程 (以内源性 Co-IP 为例)[1] 01样本准备

采用适当的方法收集细胞，使用含有合适的蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液裂解细胞。

02固相介质准备

将含有保护液的蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖混匀取出，用平衡液清洗磁珠/琼脂糖凝胶。

03预清洗 (可选)

将细胞裂解液或已预处理的样本用蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖进行预清洗，去除非特异性结合的蛋白质。

04免疫沉淀

预清洗的样本中加入诱饵蛋白的特异性抗体，孵育促进抗体与蛋白结合。加入蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖继续孵育使其与复合物结合。

05洗涤

洗涤复合物，去除非特异性结合蛋白。

06洗脱

加入洗脱缓冲液，洗脱。

07分析

Western Blot 或质谱检测分析沉淀的诱饵蛋白及与其结合的靶标蛋白。

 小贴士： 内源性 Co-IP 实验可选择蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖；外源性 Co-IP 实验中蛋白携带标签 (如 Flag、HA、c-Myc、GST 等)，可以选择标签抗体类磁珠/琼脂糖凝胶珠 (如 Anti-Flag 磁珠、Anti-HA 磁珠、Anti-c-Myc 磁珠、Anti-GST 磁珠等)，可一定程度增强丰度，减少 IgG 干扰。

Co-IP 结果解读

随着 Co-IP 实验流程的完成，我们终于手握初步数据！那么，这些数据能告诉我们什么秘密？结果出来了，肿么分析呢？

以下让小 M 通过两个经典案例，来看看如何解读实验结果，挖掘蛋白质相互作用的“朋友圈”！

内源性 Co-IP 结果解读

图 3. 内源性 ANT2 和 GRP75之间存在相互作用[6]。

外源性 Co-IP 结果解读

图 4. 外源 GRP75 可增强 ANT2-UCP1 的相互作用[6]。

03

避坑指南：如何高效无误地进行 Co-IP?

样品准备：打好地基

拉蛋白就是请客吃饭，不给它们舒适的环境，谁都不愿来！ 

抗体选择：定向输出

抗体选不好，后果你懂的……无论是拉下目标蛋白还是背景干扰，抗体都能“一锤定音”。 

实验设计：精准操作

Co-IP 实验不止“拉下”，其他环节也是“硬仗”。

 

04

经典问题和解决方案

如何让你的 Co-IP 实验更上一层楼？

每次实验的具体条件、操作步骤记得详细记录，这样才能在出现问题时找到原因，不断优化喔

05

小结 每一个 Co-IP 实验都是一场精彩的侦探游戏，我们不仅是执行者，更是策略家。这就是科研人的浪漫——在实验中找寻未知的兴奋，用结果揭示生命的奥秘。

如果你觉得这篇干货满满的 Co-IP 秘籍有帮助，别忘了点赞、分享哦！期待在评论区看到你们的精彩讨论和宝贵经验！我们下期再见，继续解锁更多实验技巧，让科研不再有坑，只有惊喜！

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参考文献：

[1] Lin JS, et al. Protein-Protein Interactions: Co-Immunoprecipitation. Methods Mol Biol. 2017;1615:211-219. [2] Tan L, Yammani RR. Co-Immunoprecipitation-Blotting: Analysis of Protein-Protein Interactions. Methods Mol Biol. 2022;2413:145-154.[3] Lee C. Coimmunoprecipitation assay. Methods Mol Biol. 2007;362:401-6.[4] Tang Z, et al. Analysis of Protein-Protein Interaction by Co-IP in Human Cells. Methods Mol Biol. 2018;1794:289-296.[5] Burckhardt CJ, Minna JD, Danuser G. Co-immunoprecipitation and semi-quantitative immunoblotting for the analysis of protein-protein interactions. STAR Protoc. 2021 Jul 6;2(3):100644.[6] Chen X, et al. GRP75 triggers white adipose tissue browning to promote cancer-associated cachexia. Signal Transduct Target Ther. 2024 Sep 26;9(1):253.