干货分享 | In Vivo 同型对照抗体—对照实验的秘密武器 | MedChemExpress (MCE)

 什么是同型对照抗体？一定要用吗？用 PBS 替代是否可行？同型对照抗体该怎么选？




Tips：

• 对照抗体包括阳性对照抗体和阴性对照抗体。

• 阴性对照抗体一般为同型对照抗体。

• 阳性对照抗体一般为已进入临床研究或者临床已经获批被证明有效的抗体。

01
什么是同型对照抗体？

同型对照抗体 (Isotype control antibody) 通常用于在体外和体内准确检测抗体药物作用和功效，评估非特异性结合或背景信号。它们与研究抗体 (实验抗体) 有相同的类别和亚类，但是它们与目标靶点无特异性结合。

图 1. 用作阴性对照的同型对照抗体。 

 MCE 同型对照抗体：

• MCE 同型对照抗体专门为动物体内实验研究定制，已经在体内药效研究中成功通过验证。
• MCE 同型对照抗体是以 Hen egg lysozyme / HA protein of H7N9 / trinitrophenol 为抗原在 CHO 细胞中表达的重组抗体。抗原蛋白在人与小鼠中均不存在，从而避免了发生交叉反应。
• MCE 同型对照抗体在低内毒素条件下生产，并通过了严格的质量控制。每个同型对照抗体都能适用于多方面的应用，如作为体内阴性对照，流式抗体等。

02
为何使用同型对照抗体？

在进行体内药效评价和体外免疫检测实验时，同型对照抗体的作用至关重要：

• 评估非特异性结合：由于抗体与靶细胞上的 Fc 受体结合，如 B 细胞、树突状细胞、NK 细胞及巨噬细胞等，可能导致假阳性^[1]。因此，同型对照抗体可以帮助排除由待测抗体的 Fc 与 FcR 结合导致对疗效分析可能产生的影响；
• 优化实验条件：不清楚表达情况的时候，特别是确定某种抗原是否在细胞表达以及相应表达含量时，一定要用同型对照来界定阴性；
• 确保结果的准确性：它们是实验结果可靠性的保证。

图 2. 抗体 Fc 介导的效应器功能^[1]。

03
PBS 是否可作同型对照抗体的“平替”？

同型对照抗体作为体内疗效的重要工具，为准确评价抗体药物效应提供适当的阴性对照。与同型对照进行比较，可以避免对抗体功效产生高估或低估，对于下游结果的免疫分析和数据分析非常重要。
PBS 作为对照（如 PBS）可能会导致数据的假阳性。而高质量的同型对照抗体可以准确区分精准药物开发分析的特异性与背景。
04
同型对照抗体选择原则？

1. 种属来源相同 – Mouse, Rat, Human；
2. 亚型相同 – IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3；
3. 亚链相同 – kappa, lambda;
4. 浓度剂量相同 – 对照抗体的使用浓度或剂量应与实验抗体相同或相似；
5. 抗体质量 – 选择高纯度、低内毒素的同型对照抗体。
IgG 亚类在小鼠模型和人类中差异最大。人 IgG 同种型由四个亚类 (IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4) 组成，每个亚类包含不同的重链。在小鼠中，IgG 亚型分为五个亚类 (IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 和 IgG3)。在大鼠中，有四个亚类 (IgG1、 IgG2a、IgG2b、IgG2c)。

图 3. 流式细胞术以 Mouse IgG2a 作为阴性对照^[2]。 

使用抗原特异性抗体与同型对照抗 (a)，而用 KLH 蛋白免疫小鼠产生的同型对照抗体不结合 (b)。用抗原特异性鼠抗人 CD4 抗体对人 PBMC 染色时，可检测到阳性荧光信号，而用相应的鼠 IgG2a 同型对照抗体则检测不到阳性信号。

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 参考文献：
[1] Schmid AS, et al. Advances in antibody engineering for rheumatic diseases. Nat Rev Rheumatol. 2019 Apr;15(4):197-207.

[2] Hammerbeck, C. et al. Primary and Secondary Antibodies and Flow Cytometry Controls. In: Flow Cytometry Basics for the Non-Expert. Techniques in Life Science and Biomedicine for the Non-Expert. Springer, Cham. 2018.