GSK126是一种EZH2抑制剂

　　GSK126（GSK2816126A）是一种有效，选择性的EZH2甲基转移酶抑制剂，IC50为9.9 nM。

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　　生物活性

　　体外研究

　　GSK126以相似的效力有效抑制野生型和突变型EZH2甲基转移酶活性（K一世=0.5-3 nM）与所用底物无关，与S-腺苷甲硫氨酸（SAM）竞争，与肽底物不竞争。GSK126对其他甲基转移酶和多种其他蛋白质类别（EZH1、IC50=680纳米）。用GSK126处理三种SCLC细胞系，诱导生长抑制。SCLC细胞系（Lu130、H209和DMS53）用0.5、2和8μM GSK126处理，并通过WST-8测定分析生长曲线。在所有三种细胞系中均观察到8μM GSK126处理对细胞生长的抑制，而Lu130和H209对GSK126更敏感，即使在较低剂量下

　　体内研究

　　GSK126在雌性米色SCID小鼠中以每20 g体重0.2 mL的剂量体积腹膜内给药。GSK126有效抑制EZH2突变DLBCL细胞系的增殖，并显着抑制小鼠EZH2突变DLBCL异种移植物的生长。

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

　　实验参考方法

　　激酶检测

　　制备包含野生型或突变型（A677G、Y641N、Y641C、Y641H、Y641S或Y641F）EZH2的五成员PRC2复合物（Flag-EZH2、EED、SUZ12、AEBP2、RbAp48）。GSK126溶解在DMSO中，并以0.6 nM至300 nM的浓度进行测试，最终DMSO浓度为2.5%。与喜欢H3K27me0作为体外底物的野生型EZH2相比，EZH2 Y641突变体更喜欢H3K27me2并且对H3K27me0或H3K27me1几乎没有活性。A677G突变体与EZH2的野生型和Y641突变体形式的不同之处在于它有效地甲基化H3K27me0、H3K27me1和H3K27me2；因此，使用K27me0（野生型，A677G EZH2）、K27me1（A677G EZH2）或K27me2（A677G、Y641N、Y641C、Y641F、Y641F）和Y6ZH的组蛋白H3肽（残基21-44；最终10μM）作为甲基转移酶底物。将GSK126添加到平板中，然后添加6 nM EZH2复合物和肽。由于GSK126的效力处于或接近在[SAM]=K下运行的测定的紧密结合极限米，IC50值是在竞争底物SAM相对于其K的高浓度下测量的米（7.5μM SAM，其中SAM K米是0.3μM）推荐阅读：BRD0639抑制剂：https://www.medchemexpress.cn/brd0639.html

　　细胞检测

　　JUB-和PTRF-引入的DMS53细胞以1×10的密度接种396孔板中的细胞/孔，并在12、36、60和84小时使用WST-8试剂盒分析细胞生长。还使用WST-8试剂盒分析了经过DZNep或GS??K126处理的Lu130、H209和DMS53的细胞生长。DZNep以5 mM溶解在PBS中，并以5μM的终浓度培养细胞。GSK126以10 mM溶解在DMSO中，并以0.5、2和8μM培养细胞。

　　动物实验方法

　　老鼠

　　GSK126或载体以每20 g体重0.2 mL的剂量体积腹膜内给药。Pfeiffer或KARPAS-422细胞（1×107）在100%Matrigel中被植入雌性米色SCID小鼠的皮下。用卡尺测量肿瘤，并根据肿瘤大小随机分成治疗组。对于功效研究，在开始给药前将10只小鼠随机分配到每个治疗组中，一旦肿瘤体积约为200 mm，则开始GSK126治疗3在Pfeiffer和KARPAS-422研究和500毫米3在KARPAS-422间歇给药研究中。每周给小鼠称重并用卡尺测量肿瘤两次。假设两个方差相等的样本进行双尾t检验。

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。