Enzalutamide恩杂鲁胺

　　Enzalutamide （MDV3100） 是一种雄激素受体 （androgen receptor （AR）） 拮抗剂，在 LNCaP 前列腺细胞中抑制 AR 的 IC50 值为 36 nM。Enzalutamide 是一种自噬 （Autophagy） 激活剂。

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　　生物活性

　　体外研究

　　Enzalutamide （MDV3100）在抗去势LNCaP/AR细胞（AR过表达）中与16β-[18F]氟-5α- dht （18-FDHT）的竞争试验中对AR具有更强的亲和力。Enzalutamide对LNCaP/AR前列腺细胞无激动作用。Enzalutamide与合成雄激素R1881结合，在亲代LNCaP细胞中拮抗前列腺特异性抗原（PSA）和跨膜丝氨酸蛋白酶2 （TMPRSS2）的诱导。Enzalutamide抑制突变AR蛋白（W741C, Trp741突变为Cys）的转录活性。

　　Enzalutamide还可防止核易位和配体受体复合物的共激活剂募集。

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。这些资料只供参考之用。

　　体内研究

　　Enzalutamide （MDV3100）在10 mg/kg剂量下可诱导LNCaP/AR异种移植雄性阉割小鼠肿瘤大幅消退。

　　Enzalutamide在0.5- 5mg /kg的静脉和口服剂量下表现出剂量无关的药代动力学。

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。这些资料只供参考之用。

　　细胞试验

　　LNCaP细胞（107个/条件）在添加5%炭脱血清的RPMI培养基中培养22天，然后用DMSO或1 nM R1881与抗雄激素（DMSO, 1 μM ICI 176334, 10 μM ICI 176334, 1 μM RD162, 10 μM RD162, 1 μM MDV3100或10 μM MDV3100）联合处理8小时。收集相同的细胞进行PSA和tmprss2mrna的qRT-PCR。剩余的细胞用1%多聚甲醛交联10分钟，然后加入甘氨酸，样品离心（4°C, 4000转，5分钟）以停止进一步交联。染色质免疫沉淀使用染色质免疫沉淀测定试剂盒进行。采用实时荧光定量PCR扩增免疫沉淀DNA。引物是正向的PSA增强子atgttcacattagtacaccttgcc和反向的tctcagatccaggcttgcttactgtc和正向的TMPRSS2增强子tggtcctggatgataaaaaaagttt和反向的gacatacgccccacaacaga。

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　　动物实验

　　老鼠

　　经过5天的驯化期后，5- 9周龄的雄性CB17SCID小鼠被阉割，在接种肿瘤细胞前再让其恢复5天。用共表达外源性AR的LNCaP细胞和AR依赖的报告构建物ARR2-Pb-Luc （LNCaP-AR- lux细胞）构建人前列腺癌异种移植模型。着床前，加入胰蛋白酶- edta制备LNCaP-AR-Lux细胞，用完全培养基洗涤，收集并以20×106 cells/mL重悬。用Matrigel将细胞悬液稀释至2×106个细胞/0.2 mL，并在肩胛上区皮下注射。治疗开始时（80天）监测肿瘤生长至100mm3的体积。LNCaP-AR-Lux细胞的肿瘤切除率为70% ~ 80%。每周用数字卡尺测量2 ~ 3次体重和肿瘤体积（width2×length/2），并确定平均肿瘤体积。试验药物在吐温80:PEG 400中稀释，4°C保存，直到口服灌胃给药。每组小鼠（n=7）连续28天每天给予1、10或50 mg/kg Enzalutamide治疗，对照或50 mg/kg ICI 176334。在治疗期结束或肿瘤体积超过1,000 mm3时，对动物实施，并收集血液和组织样本进行分析。

　　老鼠

　　雄性SD大鼠（n=3）经尾静脉（静脉）灌胃Enzalutamide，剂量为1mg /kg，给药后置于代谢笼中。在给药后，在以下时间间隔内收集尿液和粪便样本：0-2、2-4、4-6、6-10、10-24、24-48和48-72小时。用蒸馏水冲洗代谢笼，并在72小时将残留物添加到尿液样本中。为了提取粪便中存在的Enzalutamide，将样本与50%甲醇大力摇晃12小时。

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。这些资料只供参考之用。