Cycloheximide放线-（菌酮）

　　Cycloheximide （Naramycin A） 是一种抗真菌 （antifungal） 抗生素，是真核生物蛋白质合成 （protein synthesis） 的抑制剂，抑制体内蛋白质合成和 RNA 合成的 IC50 值分别为 532.5 nM 和 2880 nM。Cycloheximide 可抑制铁死亡 （ferroptosis） 并抑制自噬 （autophagy）。

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　　生物活性

　　体外研究

　　放线-菌酮 （CHX） 是最常用的实验室试剂，用于抑制蛋白质合成。放线-（菌酮）已被证明可以阻止真核翻译的延伸阶段。放线-（菌酮）结合核糖体并抑制 eEF2 介导的易位。令人惊讶的是，放-线菌酮允许在停止任何进一步延伸之前进行一个完整的易位循环。已经推测放线-（菌酮）需要 E 位点结合的脱酰 tRNA 才能发挥活性

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

　　体内研究

　　在用 200 ?A 电击训练之前，小鼠接受 30、60 或 120 mg/kg 的放线-（菌酮）注射液。放线-（菌酮）对记忆测试试验的延迟有显着影响 （P<0.001）。在盐水控制中，这种冲击水平导致测试试验的延迟显着高于训练时的延迟。注射最低剂量的放线-（菌酮）测试，30 毫克/公斤，导致测试试验的潜伏期显着高于盐水对照组中观察到的潜伏期。接受两种较高剂量放线-（菌酮）中的任何一种的小鼠在测试试验中的潜伏期与生理盐水组的潜伏期相当，即在这些条件下，较高剂量既不会增强也不会损害记忆，导致倒 U 型剂量反应曲线用于放线-（菌酮）增强记忆。 用三苯基四唑氯化物 （TTC） 对梗塞区域进行形态计量分析测量的梗塞体积在 HI 后 0 小时或 6 小时分别给予放线-（菌酮）时显着减少 92% 和 61%，但如果放线-（菌酮） Cycloheximide显示梗塞减少的趋势不显着与 HI 对照组相比，在缺氧缺血 （HI） 后 12 小时给药，延迟至 HI 后 24 小时给药时未观察到保护作用

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　　实验参考方法

　　细胞检测

　　为了测试细胞增殖，将每孔 3000-5000 个细胞（HeLa、HTB1 和 HEK 293T 细胞；Jurkat、BT 474、HCC 1395、HCC 1937、HCC 2218 和 MDA MB231 细胞；MCF 10A）接种到 96 孔板中允许粘附过夜。然后加入以指定浓度 （0.1 nM-1000μM） 溶解在 DMSO 中的放线-（菌酮），并将细胞再孵育 24 小时。[3H]-胸苷每孔加入 1 μCi，再继续孵育 7 小时。细胞用 PBS 洗涤两次，然后用胰蛋白酶消化，然后用 Tomtec 收集器收集并与 GF/C 滤垫结合。然后通过闪烁计数测量胸苷摄取

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　　动物实验方法

　　老鼠

　　本实验使用雄性 ICR 小鼠（大约 2 个月大）。放线-（菌酮）以 0（盐水对照）、30、60 或 120 mg/kg 的浓度 IP 给药。在训练前 30 分钟注射放线-（菌酮）线菌酮。120 mg/kg 剂量通常用于研究小鼠的健忘症。请注意，大鼠的遗忘放线-（菌酮）剂量 （1-3 mg/kg） 远低于小鼠，这与大鼠和小鼠 LD50 的相似差异一致。注射后 30-60 分钟，120-150 mg/kg 的放线-（菌酮）剂量导致大约 95% 的脑蛋白合成抑制；30 mg/kg 的剂量对脑蛋白合成产生大约 80% 的抑制作用。

　　大鼠

　　在甲氧氟烷麻醉下，在 7 天大的 Sprague Dawley 大鼠幼崽中进行单侧颈动脉结扎。颈部在中线切开，右颈总动脉用 4-0 丝久结扎。每只动物的手术总时间从未超过 5 分钟。手术后，将大鼠送回其母亲进行恢复和喂养 2 小时。然后将幼崽暴露于 100 分钟的缺氧 （8% O2, 92% 氮2） 将它们放置在部分浸没在温控水浴中的密闭室中，以保持室内环境温度恒定在 36°C。在 HI 与放线-（菌酮）治疗组中，大鼠幼崽在恢复的 0、6、12 或 24 小时接受剂量为 0.6 mg/kg 的放线-（菌酮）腹腔注射，并给予等量生理盐水给 HI 对照团体。然后，幼鼠被送回它们的大坝直到牺牲；分别在 HI 后 48 小时和 72 小时，在戊巴 +比妥深度麻醉（60 毫克/千克，腹腔内）下获得整个脑组织，用于流式细胞术和氯化三苯基四唑鎓（TTC）。

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。