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MCE | 细胞实验——多溶剂集合
309 人阅读发布时间：2021-09-01 10:23
■ 不到不得已，谁也不想现用现配
细胞实验的工作浓度通常在 μM 级别，有的还是 nM 和 pM，要做到现用现配，难度系数有点高，好比让一个日均不到 1000 步的人去爬 5000 米的山峰，这难度，你细品！一方面这个操作对天平的精度要求很高，误差太大，再者，每一次称量都会有损失，称量的过程也难以做到无菌操作，当然，对于一些极不稳定的化合物，比如有极易氧化的特性的化合物，现用现配是刚需。
■ 不提比例就判定有毒，实在是不负责任的耍流氓行为
以 DMSO 为例，一般建议其终浓度在 0.1% 以下，这个浓度是非常保守的建议了，有一些细胞本身并不敏感，可以承受 0.5% 的 DMSO，甚至 1% 的 DMSO 对细胞活力也没有明显影响。不过呢，不管什么比例，记得要做好对照哦！
■ 凡事都有例外
正如前面所提到的，DMSO 固然可用于诸多化合物的溶解，但是面对含铂化合物的时候，也是无能为力呢，这个时候，就需要 DMF 等辅助出场了。再比如辛伐他汀 (Simvastatin)，需要溶于乙醇、再用 NaOH 激活，才可进行实验。
■ 溶解药物，既要讲“法理”，也要通“人情”
比如，GW4869 微溶于 DMSO，难溶于水，除了借力甲磺酸，也可用 DMSO 配置成均匀的混悬液作为储备液，最后用培养基稀释可达到澄清状态；比如，天气冷的时候，可先预热 DMSO 母液和培养基，这样稀释后减少析出的可能性；比如配置/稀释的过程中，如遇到析出情况，可借助超声/加热的方式辅助溶清；比如购买了大量粉末，瓶子不够大，无法配置到相应浓度的时候，可分步溶解再转移至大容器处理。
■ 不要随便拒绝没听过的溶剂
THF、丙酮、乙腈、乙酸乙酯，这些溶剂不常见，却是友好的存在，比如丙酮，在 MCF-7、RAW-264.7 以及 HUVEC 细胞系中，比 DMSO、乙醇和 DMF 都更加友好、毒性更小。再比如在 CV1-P 细胞系中，0.5% THF 对细胞活力也没有明显影响。
参考文献
1. Shigeo Nagashima, Hiroaki Okamoto, et al. Hepatitis E virus egress depends on the exosomal pathway, with secretory exosomes derived from multivesicular bodies. J Gen Virol. 2014 Oct;95(Pt 10):2166-2175.
2. S Adler, S. Bremer, et al. The effects of solvents on embryonic stem cell differentiation. Toxicol In Vitro. 2006 Apr;20(3):265-71.
3. Leila Jamalzadeh, Hosein Ghafoori, et al. Cytotoxic Effects of Some Common Organic Solvents on MCF-7, RAW-264.7 and Human Umbilical Vein Endothelial Cells. Avicenna J Med Biochem. 2016 June; 4(1):e33453.
4. Orly Livny, Betty Schwartz, et al. Lycopene inhibits proliferation and enhances gap-junction communication of KB-1 human oral tumor cells. J Nutr. 2002 Dec;132(12):3754-9.
细胞实验的工作浓度通常在 μM 级别，有的还是 nM 和 pM，要做到现用现配，难度系数有点高，好比让一个日均不到 1000 步的人去爬 5000 米的山峰，这难度，你细品！一方面这个操作对天平的精度要求很高，误差太大，再者，每一次称量都会有损失，称量的过程也难以做到无菌操作，当然，对于一些极不稳定的化合物，比如有极易氧化的特性的化合物，现用现配是刚需。
■ 不提比例就判定有毒，实在是不负责任的耍流氓行为
以 DMSO 为例，一般建议其终浓度在 0.1% 以下，这个浓度是非常保守的建议了，有一些细胞本身并不敏感，可以承受 0.5% 的 DMSO，甚至 1% 的 DMSO 对细胞活力也没有明显影响。不过呢，不管什么比例，记得要做好对照哦！
■ 凡事都有例外
正如前面所提到的，DMSO 固然可用于诸多化合物的溶解，但是面对含铂化合物的时候，也是无能为力呢，这个时候，就需要 DMF 等辅助出场了。再比如辛伐他汀 (Simvastatin)，需要溶于乙醇、再用 NaOH 激活，才可进行实验。
■ 溶解药物，既要讲“法理”，也要通“人情”
比如，GW4869 微溶于 DMSO，难溶于水，除了借力甲磺酸，也可用 DMSO 配置成均匀的混悬液作为储备液，最后用培养基稀释可达到澄清状态；比如，天气冷的时候，可先预热 DMSO 母液和培养基，这样稀释后减少析出的可能性；比如配置/稀释的过程中，如遇到析出情况，可借助超声/加热的方式辅助溶清；比如购买了大量粉末，瓶子不够大，无法配置到相应浓度的时候，可分步溶解再转移至大容器处理。
■ 不要随便拒绝没听过的溶剂
THF、丙酮、乙腈、乙酸乙酯，这些溶剂不常见，却是友好的存在，比如丙酮，在 MCF-7、RAW-264.7 以及 HUVEC 细胞系中，比 DMSO、乙醇和 DMF 都更加友好、毒性更小。再比如在 CV1-P 细胞系中，0.5% THF 对细胞活力也没有明显影响。
暴露于不同溶剂的 MCF-7、RAW-264.7 和 HUVEC 细胞的细胞存活率
参考文献
1. Shigeo Nagashima, Hiroaki Okamoto, et al. Hepatitis E virus egress depends on the exosomal pathway, with secretory exosomes derived from multivesicular bodies. J Gen Virol. 2014 Oct;95(Pt 10):2166-2175.
2. S Adler, S. Bremer, et al. The effects of solvents on embryonic stem cell differentiation. Toxicol In Vitro. 2006 Apr;20(3):265-71.
3. Leila Jamalzadeh, Hosein Ghafoori, et al. Cytotoxic Effects of Some Common Organic Solvents on MCF-7, RAW-264.7 and Human Umbilical Vein Endothelial Cells. Avicenna J Med Biochem. 2016 June; 4(1):e33453.
4. Orly Livny, Betty Schwartz, et al. Lycopene inhibits proliferation and enhances gap-junction communication of KB-1 human oral tumor cells. J Nutr. 2002 Dec;132(12):3754-9.