MCE | 磁珠 Protocol，快速捕获高蛋白

596 人阅读发布时间：2021-08-13 16:54

磁珠的优势
◎ 蛋白荷载量高
◎ 特异性强、非特异性结合性低
◎ 样品损失小
◎ 操作方便

如何操作
■ 磁珠预处理

将磁珠充分混悬，取 25-50 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液，充分混悬，置于磁力架，磁性分离，弃上清；重复以上洗涤步骤 2 次。

■ 实验方法

Step 1. 裂解细胞并准备用于免疫沉淀的样品。

Step 2. 预处理样品：通过将裂解样品单独与珠子或与无关抗体结合，以除去能与 IP 组分非特异性结合的任何蛋白质。

Step 3. 使用针对目的蛋白的抗体孵育溶液，用直接法或用间接法将抗体固定在磁珠上。继续孵育，以形成抗体-目的蛋白复合物。

Step 4. 沉淀微珠-抗体-目的蛋白复合物，去除上清液。

A/G 磁珠的 IP 实验

Step 5. 洗涤沉淀的复合物数次。使用磁珠时，每次洗涤置于磁性分离架上即可除去上清液。最后一次洗涤后，需要除去尽可能多的上清液。

Step 6. 使用低 pH 或 SDS 样品上样缓冲液从磁珠上洗脱蛋白质。

Step 7. 分析目的蛋白或蛋白复合物：SDS-PAGE，染色，质谱，Western Blotting 等。

注：具体操作细节，还需仔细阅读对应产品说明书

■ MCE 磁珠产品

MCE 磁珠产品
HY-K0202 Protein A/G Magnetic Beads
25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液	IP/Co-IP/ChIP
HY-K0203 Protein A Magnetic Beads
25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液	IP/Co-IP/ChIP
HY-K0204 Protein G Magnetic Beads
25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液	IP/Co-IP/ChIP
HY-K0201 Anti-HA Magnetic Beads
10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液	IP/Co-IP/蛋白纯化
HY-K0206 Anti-c-Myc Magnetic Beads
10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液	IP/Co-IP/蛋白纯化
HY-K0207 Anti-Flag Magnetic Beads
10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液	IP/Co-IP/蛋白纯化
HY-K0208 Streptavidin Magnetic Beads
每次结合使用 100 μL 磁珠	IP/Co-IP/ChIP/细胞分选/蛋白纯化/核酸杂交